脈沖式均質器在食品微生物快速檢測中應用研究

   隨著經濟的發展，人民對食品安全性的要求也日益提高，如何更快更好的檢測出食品能否放心食用就顯得尤為重要。微生物指標是食品檢測中一個重要的指標，而傳統的檢測方法操作準備繁瑣且樣品前處理帶有一定的缺陷和局限性。為了提高檢測效率，微生物檢測可使用快速檢測方法。現行上常用的快速檢測方法為使用快速測試片。由于測試片上含有冷水可溶性凝膠，因此無需傳統方法中傾倒瓊脂的步驟，從而避免了對細菌可能造成的熱損傷。相對于傳統平板檢測方法操作簡便、結果穩定，具有良好的實用性能，可大大簡化操作程序，提高檢測速度[1]。為了快速檢測方法能更好的開展，選擇適宜的樣品前處理的均質方式可使檢測數據更真實可靠。本文通過研究新式的脈沖式均質器與傳統的拍打式、旋轉攪拌式在使用效果上的差異，以得出使用脈沖式均質器在食品微生物快速檢測中更優的結論。

  一.材料

（1） 試驗材料

  美國3M公司細菌總數測試片，美國3M公司酵母菌/霉菌測試片，檢測樣品來源于市場隨機購買。

（2） 主要培養基

平板計數瓊脂培養基、孟加拉紅培養基、伊紅美藍瓊脂、Baird-Parker 瓊脂基礎、亞硫酸鉍（BS）瓊脂。以上培養基均由廣東環凱微生物科技有限公司提供。

（3） 主要儀器設備

ShockMixer-1 脈沖式樣品前處理器（環凱制造）、拍打式均質器、攪拌式均質器、振蕩器、高壓蒸氣滅菌鍋、超凈工作臺、電子天平、移液槍、生化培養箱。

（4） 菌株

大 腸 埃 希 菌 [CMCC（B）44102] 、金黃色葡萄球菌[CMCC26003]、福氏志賀氏菌[CMCC（B）51572]、乙型副傷寒沙門氏菌[CMCC51572]。以上菌種均由廣東環凱微生物科技有限公司提供。

（5） 脈沖式均質器的工作原理

通過高頻率震動內裝食品樣品的膠袋，產生強烈沖擊波與高速攪動聯合作用，將食品中的微生物驅趕到樣品懸液中，形成菌濃度均勻的樣品稀釋液。減輕了對樣品的破壞，從而極大地減少了樣品碎片的產生。食品樣液澄清度高，能與快速檢測方法更配套。

 二.試驗方法

1.平板法

   脈沖式均質器的操作步驟為，取一無菌袋打開置于天平上稱取25 g樣品，倒入所需225 mL無菌生理鹽水，置于脈沖均質器的振蕩環中，脈沖時間設30 s，運行均質。再分別依照GB/T4789.2-2010 ， GB4789.4-2010 ， GB/T4789.10-2010 ，GB/T4789.15-2010，GB/T4789.5-2003進行。

2.快速測試法

22.1 細菌總數快速測試片法

（1）利用脈沖均質器把樣品制成1∶10的樣品勻液，按樣品的特性再進一步稀釋為1∶100，1∶1000等濃度的供試液。

（2）在平坦的實驗臺表面解開測試片的上層膜，用移液槍吸取1 mL樣品供試液，垂直滴加在測試片的中央。把上層膜蓋下或直接落下，但不可滾動上層膜。使用壓板隆起面底朝下，放置在上層膜中央，輕輕地壓下，使樣液均勻覆蓋于圓形的培養面積上，切勿扭轉壓板。拿起壓板，靜置至少1 min以使培養基凝固。每個

樣品做2個平行試驗。

（3）測試片的透明面朝上，可堆疊至20片，水平置于培養箱內

36±1 ℃培養48±2 h。

2.2.2 酵母菌霉菌快速測試片法

（1）樣品前處理同2.2.1（1）。

（2）測試片使用方法同2.2.1（2）。

（3）將測試片的透明面朝上，水平置于培養箱內21~25 ℃培養3~5 d。

3 結果與討論

3.1 脈沖式均質器對微生物的殺滅影響用現行國標平板計數法分別檢測大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、福氏志賀氏菌、乙型副傷寒沙門氏菌的菌懸液。把各一定濃度的菌懸液分別以15 s、30 s、60 s、180 s 的脈沖時間處理，檢測脈沖波處理是否會對微生物生存造成不利影響，結果見表1。由實驗結果可見脈沖處理不影響大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、福氏志賀氏菌、乙型副傷寒沙門氏菌的生存，不對其構成殺滅作用。

表1 脈沖前處理對標準菌株生存的影響

3.2 比較試驗

對市場上隨機購買的5個樣品分別采用脈沖式均質器、拍打式均質器與旋轉攪拌式均質器進行前處理后利用微生物快速測試片，對檢品的菌落總數和霉菌進行快檢。同時用脈沖法前處理后的樣液做國標的平板法，結果見表2。從表中可看出脈沖式前處理后，使用快速測試紙片法測菌落總數與霉菌的結果，與用脈沖式

前處理后用傳統的國標平板法得出的數據相同，說明使用食品快速測試紙片測定菌落總數與霉菌的結果是可信的。而對比脈沖式、拍打式和旋轉攪拌式前處理的數據，可說明脈沖式的均質效果更好，檢測數據更接近實際菌數。

4 結論

在市面上流通的食品，大部分都屬于快速消費品，因此提高此類快消品的微生物檢測速度和準確度，對有效的保證食用人群的身體健康具有重要的意義。在微生物快速檢測中，采用快速測試片是常用的方法。此方法具有顯著的優點：

*:減少培養基配制工作，可及時檢測，縮短準備時間。

第二:在取樣時同時接種，結果更能反映當時樣本中真實的細菌數。

第三:不需要大量的玻璃器皿，操作簡便；易于保存，便于運輸，工作量小。

避免了熱瓊脂法不適宜受損細菌恢復的缺陷。在食品的微生物快速檢測中，樣品前處理的好壞會影響快速檢測的準確度。現時上比較新式的方法是使用脈沖式均質器。這種方法優于目前國內普遍使用的拍打式和旋轉攪拌式均質器。脈沖式前處理對食品中微生物無殺滅作用，通過與國標方法對比，證實檢測效果良好，可以應用于微生物快速檢驗工作中。脈沖式均質器的優點有：

*，減少食品碎片的產生，zui大限度地減少對一些快速檢驗方法的干擾因素。

第二，無需打碎樣品，不會導致樣品處理袋的破裂。

第三，樣品碎片較少，樣品液澄清，易于取樣，易于過濾，節省時間。

第四，的樣品處理方法微生物的釋放效果等同甚至優于其他方法。世界上已有一些國家或組織批準了這種方法，如標準化組織在《ISO7218：2007食品與飼料中微生物微生物學檢驗總的要求與指導》第三版5.4中，把脈沖均質法列為三種儀器樣品均質前處理方法之一[2]。因此，在微生物快速檢測中，使用脈沖式均質器均質可提高工作效率和減少檢測的干擾性，應大力推廣應用于食品微生物快速檢測前處理中。